基因工程质粒dna的提取实验思考题(为什么通常选用质粒来运载目的基因)

为什么基因操作技术中常需要提取质粒DNA?

质粒是独立于染色体外能够自我复制的环状DNA分子,质粒提取采用的是强碱裂解法。基本原理是:细菌悬浮液暴露于高PH的强阴离子洗涤剂中,细胞壁被裂解,染色体DNA和蛋白质发生变性,相互缠绕形成大型复合物。

然后被十二烷基硫酸盐包裹,当用钾离子取代钠离子时,复合物会从溶液中沉淀下来,离心去除后,质粒DNA就存在于上清液中。

由于DNA带负电,而质粒提取柱相当于一个阴离子柱,能够在高盐的条件下吸附DNA,然后通过去离子水洗脱,就得到纯化的质粒DNA了

质粒dna的提取与基因组dna的提取在原理和方法方面有何异同?

  质粒DNA提取一般用沸水浴法和碱裂解法,现在一般都采用碱裂解法,并有试剂盒可用。它主要是将细胞内的环状质粒提取出来,一般需要用SDS裂解,RNA酶降解,然后过柱,再进行洗脱.过程比较简单。  而基因组DNA提取则较为复杂,也需要用SDS裂解和RND酶降解,但降解时间较长,同时对有些革兰氏阳性细菌还要进行溶菌酶处理,最后用氯仿-苯酚进行除蛋白,这一步重复进行多次,在用氯仿除去多余的苯酚,用乙醇清洗烘干后溶于TE缓冲液中。整个过程比提质粒更复杂,耗时也更长。

质粒如何提取?

实验室用公司试剂盒提取质粒,一般采用的是碱裂解法。比如从大肠杆菌的菌液中提取,基本原理是先加入RNA酶,把RNA去掉,然后用碱裂解菌体,用酸平衡,并且SDS和蛋白质结合形成沉淀,顺便把与蛋白结合的基因组DNA沉淀下来。

最后上清中含有质粒DNA,把它过柱洗脱下来溶到水中就完成了质粒的提取。

提取质粒的方法?

质粒抽提

质粒抽提方法即去除 RNA,将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒。

提取质粒DNA的方法有很多种,从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取,从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取,从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等,各种不同的方法各有其优缺点,根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。

质粒提取的方法?

质粒抽提

质粒抽提方法即去除 RNA,是将质粒与细菌基因组 DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒的方法。

提取质粒DNA的方法有很多种,从提取产量上分可分为微量提取、中量提取、大量提取,从使用仪器上分可分为一般提取和试剂盒方法提取,从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等,各种不同的方法各有其优缺点,根据不同的实验目的可以采用合适的提取方法。

为什么提取质粒dna?

质粒多为一些双链、环状的DNA分子,是独立于细菌染色体之外进行复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒是进行分子生物学实验操作,进行遗传工程改良物种等工作时最主要的DNA载体。

在我们的细胞实验中经常会用到质粒DNA,现在都用剂盒非常方便,而且菌体培养后,可以多管浓缩提取,提到的质粒量多,可以-20℃保存,以后用于酶切、转化等实验,可以提前跑个胶,只要不降解,就可以继续用,避免每次要用,都要培养一遍再提取一遍。

版权声明